摘要:
雜交構樹、組織培養、滅菌方法、激素配比、愈傷組織的誘導、芽的增殖、壯苗及生根
雜交構樹的情況
雜交構樹為桑科構屬落葉喬木,又名鹿仔樹、榖漿樹,是構樹優良種源的雜交種。具有速生、適應性強、分布廣、易繁殖、熱量高、輪伐期短的特點。其根係淺,側根分布很廣,生長快,萌芽力和分蘖力強,耐修剪,抗汙染性強,是良好的經濟林和生態林品種。構樹在中國的溫帶、熱帶均有分布,不論平原、丘陵或山地都能生長,其葉是很好的豬飼料,其韌皮纖維是造紙的高級原料,材質潔白,其根和種子均可入藥,樹液可治皮膚病,經濟價值很高。
雜交構樹的價值
現代研究表明,構樹葉總黃酮具有抑菌抗癌防腐的作用;其果實楮實子具有清肝明目、補肺益腎之功效,所含有的紅色素及提取物具有不同程度的抗氧化作用;構樹纖維表麵光滑,部分纖維還有不明顯的轉曲,具有類似苧麻的橫紋,可廣泛用於造紙產業及新型紡紗材料等領域;其還具有吸附空氣中的有害氣體和滯塵等功能,是較為優良的生態保健園林綠化樹種。
戚亞偉等研究表明,構樹葉對養分過剩而導致的小鼠肥碩有治療效果,並能促進其油脂減少,改變內髒脂肪變性。
王克榮等研究表明,蔬菜害蟲能被構樹葉汁液有效地殺死,可以用構樹葉開發出天然生物殺蟲劑。
瞿曉晶等研究表明,構樹種子油對羥基自由基的抑製率高達93.56%。
構樹子還具有壯筋健骨,清熱明目的功效,可用於治療腰膝不適,腎虧目昏。此外,構樹葉還可以代替苜蓿草粉和豆粕做成飼料添加在牛羊等的日糧中,其樹皮、木材、葉、花、果實、種子、根、乳汁等皆可綜合利用,經濟效益潛力很大。
雜交構樹的繁育
目前,構樹主要靠常規的無性扡插繁殖,但由於材料來源不足,扡插成活率不高,費時費工,難以滿足當前大麵積栽培及推廣的需要。由於構樹具有巨大的經濟價值,其需求量也在日趨增加。但雜交構樹在自然條件下,生長周期長。目前免费看片网站91體係已經成熟,國內也有大量的免费看片网站91企業在生產,產生了很大的經濟價值。
構樹不同條件下的免费看片网站91試驗
以MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎培養基,加入不同質量濃度的6—BA和NAA。6—BA采用0.5、1.0、1,5mg/L3個水平。NAA采用0.5,1.0、1,5mg/L3個水平。將葉片切成1 cm3左右的正方形,接入培養基中進行培養。每個水平接種20瓶,每瓶3塊葉片,培養20天後觀察並記錄愈傷組織及芽苗的生長情況。
通過優化滅菌方法和激素配比,進行愈傷組織、芽及根的誘導,建立了構樹的組織培養體係。
1、材料
供試材料為生長健壯、無病害的構樹葉片。
2、方法
2、1試驗條件
以MS培養基為基本培養基,改變激素種類、濃度及添加瓊脂、蔗糖形成不同培養基組合,並於光照時間為12h,光照強度為2500lux,培養溫度為(25±2)℃的條件下對試驗材料進行培養。
2、2試驗材料的獲取及消毒
將洗幹淨的構樹葉片用75%乙醇溶液浸泡30s,經無菌水衝洗2~3次,置於滅菌液中滅菌,並設置空白對照。滅菌液分別為9% Ca(ClO)2,0.5%升汞和10%雙氧水,滅菌時間分別設定為5、10、15 min。滅菌完成後記錄葉片的死亡率,並用無菌水衝洗4~10次,瀝幹水後迅速將葉片接種到培養基中,每瓶接種3-4個,10瓶為一組,共接9組,光照培養室中培養7天後統計葉片的汙染率和成活率。
2、3愈傷組織及芽苗的誘導
以MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎培養基,加入不同質量濃度的6-BA和NAA。6-BA采用0.5、1.0、1,5mg/L3個水平。NAA采用0.5、1.0、1,5 mg/L3個水平。將葉片切成1 cm2左右的正方形,接入培養基中進行培養。每個水平接種20瓶,每瓶3塊葉片,培養20天後觀察並記錄愈傷組織及芽苗的生長情況。
2、4壯苗培養基的篩選
以MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎培養基,加入不同質量濃度的6-BA和NAA。6-BA和設置1.0,1.5,2.0 mg/L等3個水平,NAA設置0.10,0.15,0.20 mg/L等3個水平。選擇長勢較好的基礎苗進行壯苗,每個水平做15瓶,每瓶1-2株。接種後置於光照培養室中,20天後觀察並記錄壯苗結果。
2、5構樹生根培養基的篩選
以1/2MS+0.8%瓊脂+3%蔗糖為基礎培養基,加入不同質量濃度的6-BA和NAA。采用6-BA采用0.5、1.0、1,5mg/L3個水平。NAA采用0.2、0.3、0.4、0,5mg/L4個水平。每瓶接種1~2個幼苗,每個水平接種15瓶,培養15天後觀察並記錄構樹健壯幼苗的生根情況。
2、6構樹的馴化移栽
將長有構樹幼苗的培養瓶轉移至半遮陰的自然光下,2-3天後開口煉苗。將營養缽中裝入蛭石和珍珠岩,洗幹淨幼苗根部黏附的培養基後,將幼苗移入營養缽中並澆足水。用塑料薄膜為幼苗搭建小拱棚並噴霧保濕,同時注意通風,隨後逐漸降低濕度,15天後揭去棚膜,讓幼苗在自然條件下生長。
3、結果與分析
3、1消毒劑及消毒方法的比較
從試驗結果可以得出滅菌效果很好的處理是75%乙醇溶液浸泡30 s後,再用0.5%HgCl2滅菌15 min,除菌率可以達到68.2%,外植體的成活率可達43.6%。
3、2誘導愈傷組織及芽苗培養基的篩選
構樹葉片在愈傷組織誘導培養基中培養20天後,觀察不同濃度激素比例下葉片的增殖倍數與芽苗高度等生長狀況。試驗結果得知對愈傷組織的影響較大的激素為6-BA。當20天質量濃度逐漸增大時,芽的增殖倍數逐漸變大,當6-BA質量濃度為1.5 mg/L,NAA質量濃度為1.0mg/L時,增殖倍數為5.4,愈傷組織分化效果最明顯。
因此,誘導愈傷組織分化的很佳培養基配方為MS+1.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。
3、3構樹壯苗培養基的篩選
由試驗結果分析可得對壯苗影響較大的激素為6-BA,當6-BA質量濃度為1.5mg/L,NAA質量濃度為0.2 mg/L時,壯苗效果最明顯,此時株高為3.6cm。由此可得壯苗效果很佳的培養基配方為MS+1.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。
3、4生根培養基的篩選
接種至生根培養基12天後可以看到根原基分化出的愈傷組織,15天後可看到誘導出的細小不定根。由試驗得知:當6-BA質量濃度為0.5mg/L,NAA質量濃度為1.0 mg/L時,根的生長情況很好,此時根原基的發生率為93%。由此可以得出很佳的生根培養基為1/2 MS+0.5 mg/L 6-BA+1.0 mg/L NAA+0.8%瓊脂+3%蔗糖。
3、5構樹幼苗的馴化移栽
由試驗對比得知:構樹幼苗在移栽到蛭石中的成活率高於珍珠岩。在珍珠岩中,葉片失水嚴重,苗木萎蔫,生長不良;而蛭石中的幼苗則生長良好,移栽25天後,長高3~5cm,葉片明顯變大且長出1~2條新根,原來的根伸,1~2cm。
結論
無菌材料是植物免费看片网站91快繁的前提,對葉片進行消毒時,時間過長可能會對材料造成毒害,影響葉片的生命活力;時間過短可能會造成消毒不徹底。很佳滅菌方法為0.5% HgCl2的處理15 min,在考慮選擇何種滅菌劑的同時,還綜合考慮了滅菌時間對滅菌效果的影響,與宋麗紅及劉中兵的研究思路接近。
但也有研究認為,構樹葉片外植體很佳消毒方法是0.1% 的HgCl2(加吐溫80和0.5%次氯酸鈉的二次滅菌法,這可能是由於試驗材料的來源不同及其生長環境的差異,導致材料所帶的微生物不同,從而需要滅菌的強度也有所差異。
在組織培養中,生長素類物質的主要作用是促進新梢生長,誘導外植體產生愈傷組織及促進培養組織的延伸生長;細胞分裂素類物質的主要作用是促進細胞的分裂和分化,誘導胚狀體和不定芽的形成。
在離體條件下,器官的誘導並不是由某種生長激素的濃度所決定,而是為那些參與分化的物質間的比例關係所決定,當6-BA與NAA的比例低時有利於愈傷組織的形成和芽的生長;比例高時有利於芽的分化。
本試驗研究結果表明,誘導愈傷組織分化時6-BA與NAA的適宜比例為3:2,壯苗時6-BA與NAA的適宜比例15:2;為生根時6-BA與NAA的適宜比例為1:2。
構樹的育苗技術
1、播種育苗:
A、采種整地
選擇10~15年生以上的健壯的無病植株作母樹,10月份果實成熟時采果,將果肉搓爛漂洗得純淨種子,陰幹、幹藏備用,翌年春分前後播種。選擇背風向陽,地勢較平緩的坡地,或土壤肥沃且排水良好的地方整地做畦,畦寬1m,高20cm,畦間人行道40cm。
B、播種:
在畦上開播種溝,溝寬深為6×2cm,也可采用窄幅條播,播幅寬6cm,行間距25cm,種子與細土或細沙按照1:1的比例混勻後撒播,覆土0.5cm,稍加鎮壓即可。
2、飛籽育林
選擇土壤肥沃深厚,不積水的向陽坡地或平地為造林地。栽植母樹的株間距為8×8m,選用2年生的大苗栽植,每株穴內適當施肥。當母樹林長至8~10年結實後,夏季整地除草。在秋季構樹果實成熟前1周犁地,當種子全部落下以後,淺耙使入土種子與土壤結合。
A、幼苗撫育
幼苗要及時除草鬆土,培根,每年的4~5月份和7~8月份除草兩次,鬆土施肥一次,促進林木快速生長。第一年可在林地間種黃豆,花生等短期矮杆作物和藥材,苗木高1.5~2m時剪去頂芽,促進樹幹粗長和出新芽。
B、造林定植
秋末冬初進行,坑寬深40×40cm,株行距1.2×1.3m。造林的很佳時間是大寒前後,栽時保持根須舒展,把細土培入坑至2/3處踩實,蓋草保濕,澆1次定根水。
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